期刊简介
主要报道和刊登国内外、特别是我国消化病学者具有创造性的、有较高学术水平的基础和临床研究论文、研究快报等. 对具有中国特色的研究论文, 如食管癌、胃癌、肝癌、大肠癌、病毒性肝炎、幽门螺杆菌、中医中药、中西医结合和基于作者自己研究工作为主的综述性论文, 将优先发表. 读者对象为基础研究或临床研究的消化专业工作者。
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首页>世界华人消化杂志
- 杂志名称：世界华人消化杂志
- 主管单位：华人消化杂志；新消化病学杂志
- 主办单位：山西省科学技术厅
- 国际刊号：14-1260/R
- 国内刊号：14-1260/R
- 出版周期：旬刊
期刊荣誉：国家期刊奖百种重点期刊（第二和第三届）期刊收录：上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 文摘与引文数据库, 维普收录(中), 医学文摘, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 万方收录(中)
KDM5C基因shRNA重组慢病毒载体的构建及其对肝癌HepG2细胞的增殖和迁移的影响
胡敏敏；詹浩炼；刘丽璇；项梦琦；蒲泽锦；李国平；吴灵飞
关键词：HepG2细胞, Lv-shKDM5C, GAS5, 细胞增殖, 细胞迁移
摘要：目的 制备干扰DM5C基因重组慢病毒载体,观察干扰人KDM5基因后对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及长链非编码RNA GAS5表达的影响.方法 设计3对针对KDM5C基因短发夹型RNA干扰序列(short hairpin RNA,shRNA)和1对阴性对照序列,退火后连接到pLKD载体上,经转化PCR阳性克隆筛选及测序鉴定.使用四质粒包装系统共转染293FT细胞包装重组慢病毒,慢病毒包装后用孔稀释法进行滴度测定.将慢病毒感染HepG2细胞,qRT-PCR和Western blotting检测HepG2细胞KDM5C的mRNA和蛋白表达.MTT法及细胞划痕实验检测转染Lv-shKDM5C后细胞增殖及迁移能力,同时观察lncRNA GAS5 mRNA的表达水平变化.结果 PCR扩增和测序结果证明,成功构建Lv-shKDM5C慢病毒载体.经包装产生的3组慢病毒载体滴度:Lv-shKDM5C-1是4.95×108TU/mL,Lv-shKDM5C-2是3.46×108 TU/mL,Lv-shKDM5C-3是3.08×108 TU/m L.与正常肝细胞相比,肝癌HepG2细胞KDM5C表达明显增加.与未转染组及阴性对照组相比,3组Lv-shKDM5C病毒感染HepG2细胞后KDM5C的mRNA及蛋白表达量均显著下降(P＜0.05);其中Lv-shKDM5C-3组下降为明显(P＜0.05),因此选取Lv-shKDM5C-3进行后续实验.MTT结果显示Lv-shKDM5C-3转染肝癌HepG2细胞后48 h和72 h细胞生长增殖均受到抑制(P＜0.05).细胞划痕实验结果显示Lv-shKDM5C-3中细胞迁移率明显低于阴性对照组(P＜0.05).qRT-PCR结果表明干扰KDM5C后lncRNA GAS5 mRNA表达显著升高(P＜0.05).结论 本研究成功构建了特异性沉默人KDM5C基因的shRNA慢病毒载体.将其转染肝癌HepG2后可有效抑制细胞增殖和迁移.我们首次发现干扰KDM5C还可增加长链非编码RNA GAS5的表达.
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