期刊简介
主要报道和刊登国内外、特别是我国消化病学者具有创造性的、有较高学术水平的基础和临床研究论文、研究快报等. 对具有中国特色的研究论文, 如食管癌、胃癌、肝癌、大肠癌、病毒性肝炎、幽门螺杆菌、中医中药、中西医结合和基于作者自己研究工作为主的综述性论文, 将优先发表. 读者对象为基础研究或临床研究的消化专业工作者。
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首页>世界华人消化杂志
- 杂志名称：世界华人消化杂志
- 主管单位：华人消化杂志；新消化病学杂志
- 主办单位：山西省科学技术厅
- 国际刊号：14-1260/R
- 国内刊号：14-1260/R
- 出版周期：旬刊
期刊荣誉：国家期刊奖百种重点期刊（第二和第三届）期刊收录：上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 文摘与引文数据库, 维普收录(中), 医学文摘, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 万方收录(中)
类泛素FAT10高表达肝癌细胞株Hep3B酵母双杂交cDNA文库的构建
余新；刘天；德洪波；李国惠；邵江华
关键词：人肝癌细胞Hep3B, 酵母双杂交cDNA文库, FAT10
摘要：目的:构建类泛素FAT10高表达肝癌细胞株Hep3B的酵母双杂交用cDNA文库.方法:从肝癌细胞Hep3B中提取总RNA,分离mRNA.利用反转录酶M-MLV与Oligo(dT)AnchorPrimer合成1<'st> Strand cDNA,用E.coli DNAPolymerase与E.coli DNA Ligase将RNA链置换成DNA链,合成2<'nd> Strand cDNA.将双链cDNA与EcoR Ⅰ Adaptor连接,然后用EcoR Ⅰ /Xho Ⅰ进行酶切.使用Spin Column除去短链cDNA与pGADT7载体连接,转化入E.coli DH10B,建成原始文库.然后对其进行扩增并随机挑取单菌落,酶切鉴定重组子插入片段大小.结果:提取的总RNA降解少且分子完整;RNA纯度高,相对分子质量为400-5000 bp;成功合成双链cDNA,均符合建库要求:库容量达到1.03×10<'6>克隆,原始文库滴度为2.50×10<'9> cfu/L,扩增后的文库滴度为3.60×10<'12> cfu/L.插入片段大小分布为0.5-3.5 kb,平均长度约为2.0 kb.结论:所构建文库的各项指标均达到要求,为筛选FAT10作用蛋白奠定了重要基础.
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