期刊简介
主要报道和刊登国内外、特别是我国消化病学者具有创造性的、有较高学术水平的基础和临床研究论文、研究快报等. 对具有中国特色的研究论文, 如食管癌、胃癌、肝癌、大肠癌、病毒性肝炎、幽门螺杆菌、中医中药、中西医结合和基于作者自己研究工作为主的综述性论文, 将优先发表. 读者对象为基础研究或临床研究的消化专业工作者。
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首页>世界华人消化杂志
- 杂志名称：世界华人消化杂志
- 主管单位：华人消化杂志；新消化病学杂志
- 主办单位：山西省科学技术厅
- 国际刊号：14-1260/R
- 国内刊号：14-1260/R
- 出版周期：旬刊
期刊荣誉：国家期刊奖百种重点期刊（第二和第三届）期刊收录：上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 文摘与引文数据库, 维普收录(中), 医学文摘, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 万方收录(中)
人pEGFP-PKARⅡβ重组质粒的构建及其在BGC-823胃癌细胞中的表达
王桂玲；姜佩佳；王孝会；陈薇
关键词：PKARⅡβ, 真核表达, 绿色荧光蛋白, 基因转染, 胃癌细胞
摘要：目的:研究人的蛋白激酶A调节亚基RⅡβ(PKARⅡβ)基因的绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体融合蛋白在胃癌细胞BGC-823内的表达和定位,初步探讨其在肿瘤细胞中的分子作用机制.方法:以pRSETB-PKARⅡβ质粒为模板,PCR扩增出全长PKARⅡβ编码序列,用Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后,亚克隆至含有GFP标签的融合表达栽体pEGFP-C1中.测序正确后,将重组质粒转染到胃癌细胞BGC-823中,提取细胞蛋白进行Western bolt检测.利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-PKARⅡβ在人胃癌细胞BGC-823内的定位.结果:将人全长PKARⅡβ编码序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为1.2 kb,在预期的位置产生条带.Western blot检测到了融合蛋白正确表达,分子量约为72 000 Da.并观察到GFP-PKARⅡβ在HEK293和BGC-823细胞内都有表达,且定位以细胞质为主,在细胞核内少量表达.结论:成功构建了人全长PKARⅡβ编码序列的pEGFP-PKARⅡβ真核表达载体,证实GFP-PKARⅡβ蛋白在BGC-823细胞质内特异表达,为进一步研究PKARⅡβ的在胃癌中的功能提供了重要的实验材料.
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