期刊简介
主要报道和刊登国内外、特别是我国消化病学者具有创造性的、有较高学术水平的基础和临床研究论文、研究快报等. 对具有中国特色的研究论文, 如食管癌、胃癌、肝癌、大肠癌、病毒性肝炎、幽门螺杆菌、中医中药、中西医结合和基于作者自己研究工作为主的综述性论文, 将优先发表. 读者对象为基础研究或临床研究的消化专业工作者。
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首页>世界华人消化杂志
- 杂志名称：世界华人消化杂志
- 主管单位：华人消化杂志；新消化病学杂志
- 主办单位：山西省科学技术厅
- 国际刊号：14-1260/R
- 国内刊号：14-1260/R
- 出版周期：旬刊
期刊荣誉：国家期刊奖百种重点期刊（第二和第三届）期刊收录：上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 文摘与引文数据库, 维普收录(中), 医学文摘, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 万方收录(中)
重叠延伸PCR法克隆重组复合干扰素
刘顺爱；浅野龙太郎；郭晶晶；刘志英；余康康；徐道振
关键词：重组复合干扰素, 重叠延伸PCR.原核表达, 活性鉴定
摘要：目的:用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得人工优化的干扰素.重组复合干扰素(consensus interferon,clFN)基因,用原核表达系统对其进行表达,鉴定表达的clFN活性.方法:根据大肠杆茵的偏爱密码子,人工设计cIFN的高表达基因,用overlap PCR法合成cIFN全基因.用基因重组技术构建其原核表达载体pRA-cIFN,在大肠杆茵BL21中进行高效表达,用SDS-PAGE和Western blotting鉴定cIFN表达,用GuHC1阶段透析法进行蛋白变性、复性,用TALON(His)6亲和层析柱进行纯化.用EUSA、MTS比色定量法及血凝抑制试验检测cIFN的免疫活性和生物活性.结果:成功合成了cIFN全基因,其DNA长度与理论长度534 bp相符;用基因重组技术成功构建了cIFN原核表达栽体pRA.cIFN,并用大肠杆茵BL21进行了高效表达,SDS.PAGE和western blotting鉴定结果显示,表达蛋白主要以包涵体形式存在,其分子质量符合理论值23.3 kDa:用GuHCl阶段透析法成功进行包涵体蛋白的复性.亲和层析法纯化后cIFN的ELISA、MTS比色定量法及血凝抑制试验结果显示,表达蛋白具有明显的cIFN免疫学活性、剂量依赖性PLC/PRF/5细胞增殖抑制作用和HBsAg分泌抑制作用.结论:重叠延伸PCR法是获得重组复合基因的有效简便的方法,我们通过重叠延伸PCR法获得并表达的cIFN具有明显的抗病毒、抗细胞增殖活性.
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