期刊简介
主要报道和刊登国内外、特别是我国消化病学者具有创造性的、有较高学术水平的基础和临床研究论文、研究快报等. 对具有中国特色的研究论文, 如食管癌、胃癌、肝癌、大肠癌、病毒性肝炎、幽门螺杆菌、中医中药、中西医结合和基于作者自己研究工作为主的综述性论文, 将优先发表. 读者对象为基础研究或临床研究的消化专业工作者。
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首页>世界华人消化杂志
- 杂志名称：世界华人消化杂志
- 主管单位：华人消化杂志；新消化病学杂志
- 主办单位：山西省科学技术厅
- 国际刊号：14-1260/R
- 国内刊号：14-1260/R
- 出版周期：旬刊
期刊荣誉：国家期刊奖百种重点期刊（第二和第三届）期刊收录：上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 文摘与引文数据库, 维普收录(中), 医学文摘, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 万方收录(中)
人环氧合酶-2(hCOX-2)编码基因的克隆及其反义核酸转染胃癌细胞的初步研究
吴汉平；吴开春；李玲；幺立萍；兰梅；王新；樊代明
关键词：环氧合酶, 反转录 PCR, 反义 RNA, 肿瘤, 基因转染
摘要：目的环氧合酶-2与肿瘤发生的关系已成为肿瘤研究的新热点之一.本研究旨在获得hCOX-2编码基因序列,构建其正、反义真核表达载体,并用反义重组载体转染COX-2高表达的胃癌细胞,以进一步研究其生物学作用及其在肿瘤发生中的作用机制.方法按文献报道的hCOX-2核苷酸序列设计合成PCR引物,利用总RNA抽取试剂盒从COX-2高表达的培养的人胃癌细胞系SGC7901中提取细胞总RNA,反转录合成cDNA,再用PCR方法扩增目的基因序列.PCR产物经DNA序列测定证实后,利用引物5端引入的EcoRⅠ,XbaⅠ酶切位点,通过粘端连接,将所获目的基因分别按正、反两个方向定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1中.对两种重组质粒分别进行相应的酶切鉴定.采用脂质体介导的方法用COX-2反义核酸转染SGC7901细胞,经G418筛选后,随机挑选细胞克隆.通过RT-PCR检测COX-2 mRNA水平的变化.结果应用RT-PCR反应扩增获得大小约1.9kb的特异性片段.经DNA序列分析,证实与文献报道的hCOX-2编码区序列一致.重组正义表达载体pcDNA3.1/hCOX2(+)用EcoRⅠ,XbaⅠ双酶切后,产生大小约5.4kb,1.9kb的片段;重组反义表达载体pcDNA3.1/hCOX2(-)通过Pst Ⅰ酶切,产生大小约4.5kb,1.5kb与1.3kb的片段,与预期结果相符.转染细胞经筛选后,随机挑选、扩增了3个细胞克隆,其中1个克隆稳定表达COX-2反义核酸,RT-PCR提示其COX-2 mRNA水平显著下降.结论成功克隆了hCOX-2编码基因序列,并构建了其正、反义真核表达载体.反转录PCR是克隆基因的简便、有效方法.为扩增高GC含量的cDNA模板,可在PCR反应体系中加入适量的DMSO,并采用较高退火温度.在PCR引物中加入限制性内切酶位点,可以方便地实现基因的定向克隆.COX-2反义核酸在胃癌细胞系SGC7901中得到稳定转染,转染细胞COX-2mRNA表达显著受抑制.
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